斜面的制备步骤

PDA培养基的配制及试管斜面制作

1.实验材料

1.1试剂材料

土豆，葡萄糖，琼脂，试管，试管架，天平，注射用硫酸链霉素，注射用青霉素钠，三角瓶，灭菌锅，电磁炉，超净工作台，烧杯，1mL移液器，培养皿

1.2PDA培养基配方

土豆（去皮）200g

葡萄糖20g

琼脂15-20g

蒸馏水1000mL

pH 自然

2.实验方法与步骤

2.1称量和熬煮

将土豆去皮，按自己所需的量（例如配制1L）称取土豆，将土豆切成小块放入锅内，加入适量的蒸馏水，在电磁炉上加热至沸腾，30min后用4层纱布在大量杯上过滤，弃掉滤渣，滤液用蒸馏水补足1L。

2.2溶解

用天平称取20g葡萄糖加入滤液中，用玻璃棒搅拌，使其完全溶解。

2.3分装

称取8-10g琼脂，加入所用三角瓶中，然后将滤液分装到三角瓶中，每瓶500mL，用玻璃棒将琼脂搅匀。

2.4加棉塞

培养基分装完毕后，在三角瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性。

2.5包扎

加塞后，在棉塞外用两层报纸包裹，其外用橡皮筋包扎好，标记。

2.6灭菌

将配制完成的培养基，包好的平板及其他所需用品一起放入灭菌锅灭菌（见灭菌锅使用方法）。

3.试管斜面制作方法与步骤

3.1前两步同2.1，2.1步骤

3.2加热溶解

量取500mL滤液到1000mL的烧杯中，再加入8-10g的琼脂，用玻璃棒搅匀，放入微波炉缓慢加热溶解，加热其间注意不要让培养基溢出烧杯，不时用玻璃棒搅拌。

3.3分装

等琼脂溶解后，将培养基分装到事先准备好的试管中。分装量约占试管高度的1/4，管口尽量不要沾染培养基。

3.4加塞

培养基分装完毕后，在试管口上塞上棉塞或橡胶塞，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性。

3.5包扎

加塞后，试管7-9支捆用橡皮筋捆好，在塞外用两层报纸包裹，其外用橡皮筋包扎好，标记。

3.6灭菌

将包好的试管和其他所需灭菌物品一同放入灭菌锅灭菌。

3.7摆斜面

灭菌完成后，将试管拿出，在超净工作台下摆成斜面，根据自己需要选择合适的倾斜度。